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详述弱极性色谱柱的冲洗保存要点

   详述弱极性色谱柱的冲洗保存要点
  对使用后对弱极性色谱柱,冲洗保存必不可少,使用缓冲系统的尤其要注意。推荐反相色谱系统的通用冲洗流程:
  将所有通道置换成含有较低有机相比例的水相中,比如10-30%乙腈或甲醇,然后冲洗1个小时,然后再梯度增加有机相比例,各冲洗一定时间,最终保留在高有机相比例的冲洗液里。低有机相比例的冲洗液是为了尽可能地冲洗缓冲盐。通常低压梯度洗脱的液相色谱仪采用的是四元泵,就是单泵四通道,比例阀混合。这种混合方式有个弊端,就是混合效果差,因为各通道不同比例是通过开关各通道阀的时间来控制的。往往是两通道混合,就算没有用缓冲盐,还是建议先按比例混合好了,然后走单通道,否则的话一样会造成盐析出,或者基线波动。走梯度洗脱的话,往往会把有机相通道中加入一定比例的水,或者把水相通道配成梯度洗脱的初始比例,把有机相通道配成梯度洗脱最终的比例。
  这里有两点需要说明:
  1.一般认为,色谱系统包括弱极性色谱柱的冲洗甚至保存,都可以使用流动相,只是不加缓冲盐、酸碱等。有一些品牌色谱柱,建议如果不是含盐或者强酸强碱,一般不建议冲洗。不过这只适合短期保存,也就是没隔多久又要再次使用。长期不用的色谱系统包括色谱柱还是应该冲洗后保存在高比例低极性溶剂体系中。一般建议正相系统保存在正已烷:异丙醇=90:10,反相系统保存在乙腈:水=90:10或者100%乙腈中。
  2.随着快速分离色谱柱的发展,很多的低粒径色谱柱得到应用,而且往往柱温也较高,通常达到50度或以上,这种色谱系统通常柱压也较高,贸然用高比例水相冲洗可能会导致系统超压。可以先用流动相冲洗,或者断开色谱柱,用高比例水相冲洗系统,再接上柱子逐步提高有机相比例冲洗,也可以先调低流速冲洗。而且,z好待冲洗快要结束时再降低柱温。
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